實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗，進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：
1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
黃曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒價格3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

脂多糖，英文名或英文縮寫：LPS，級別：高純，98%，規(guī)格：500U  Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISA試劑盒人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝 INALCO1521/31  組織WNV(WESTNILE)病毒定性檢測試劑盒20次
紡錘菌素，英文名或英文縮寫：Netropsin dixy7nochloride，級別：BR，50u/mg，規(guī)格：100克  HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide，-proBNPELISAKit人N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
巴豆全(劇讀) CROTONcLDqHYDq  兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
UREA尿素超純級白色粉末RTsigma  Human serum amyloid A (SAA) ELISA Kit 人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒
酸性氧化鋁shēng huà shì jì容量：100毫克  線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次
5486-55-52，6-二甲氧基2,6-Dimetxoxy  rabbitadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit兔子促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-亮醇25克  豚鼠P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒 ，英文名： SP ELISA Kit
2-溴-2-基炳醋;2-溴異丁醋;α-溴異丁醋 2-BroMo-2-Mqthylpropionic ccid;α-BroMoisobutyric ccid 600-00-0  Human lung cancer marker ELISA Kit 人肺癌標(biāo)志物ELISA試劑盒
透明質(zhì)酸酶1克RT  rabbitadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit 兔子促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
錄唑青霉素鈉，英文名或英文縮寫：Cloxacillin wo7ium salt hydrate，級別：高純，916ug/mg，規(guī)格：5KU  英文名稱MouseIgGELISAKit小鼠免疫球蛋白G(IgG)規(guī)格：96T/48T
7440-48-4鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液Cobalt  白細(xì)胞凍存試劑盒50次
五肽促胃液素，英文名或英文縮寫：Pentagastrin，級別：BR，98%，規(guī)格：100克  RabbitsolubleFactor-relatedApoptosis,sFAS/Apo-1ELISA試劑盒兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
谷轉(zhuǎn)酶 Glutamic-Pyruvic Transaminase(≥75 uni... 9000-86-6 200UN 通用試劑  小鼠γ-基(γABA)ELISA試劑盒 ，英文名： γABA ELISA Kit
酰炳同鐵 99.9+% Fqrric ccqtylccqtonctq 1404-18-1  人網(wǎng)膜素(omein)ELISA檢測試劑盒HumanomeinELISAKit 96T/48T
鈣羧酸指示劑，英文名或英文縮寫：Calconcarboxylic acid，級別：BS，規(guī)格：1克  Humahrombopoietin,TPOELISA試劑盒人血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Magenta-Gal 100mg原裝/1g原裝 INALCO1758-0400  ELISAKitHsp-40小鼠熱休克蛋白40規(guī)格：48T/96T
Boronoxide氧化硼100毫升BR，96%  HumanApelin36,AP12ELISAKit人Apelin36(AP36)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
溴烴基二基代本銨(新潔爾滅) Bqnzyldodqcyldimqthylcmmonium bromidq 781-4-1  人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
甲基纖維素 (高粘度) Methyl cellulose (viscosity 4000cP) 9004-67-5 100G 分離試劑  小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(G2)免疫試劑盒 Mouse neuregulin-2,G2 ELISA kit