實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

腺苷脫酶測試盒shēng huà shì jì容量：RT200支/包  轉(zhuǎn)基因玉米T14品系試劑盒20次

PH緩沖液　PH1.0(20℃)NA  Humanselenoprotein1,SEP1ELISAKit人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-(-)樟腦磺酸5克RT，避光  小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 ，英文名： IFN-β/IFNB ELISA Kit

5-甲氧基-2-甲基色胺 5-Methoxy-alpha-methyltryptamine,98% 1137-04-8 1G 通用試劑  大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA檢測試劑盒Ratmaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAkit 96T/48T

硬脂醋;十八醋 litxium stqcrctq 4482-1-2  人P0蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒 Human myelin protein zero aibody IgM ELISA Kit
品紅亞鈉培養(yǎng)基(濾膜法用)1米  小鼠前列腺素F(PGF)免疫試劑盒 Mouse Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit

Tween60 100ml Sigma分裝  轉(zhuǎn)化生長因子β受體2(TGF-βR2)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-βR2 ELISA Kit

甘油醛-3-嶙酸脫氫酶shēng huà shì jì容量：5克  Humaotalprostatespecificaigen,tPSAELISA試劑盒人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-拂本加醋;隊拂本加醋 4-Fluorobqnzoic ccid 426--4  ELISAKitEL小鼠內(nèi)皮脂肪酶規(guī)格：48T/96T

反玉米素核苷shēng huà shì jì容量：25克  Humanai-PL7-aibodyELISAKit人PL7抗體/抗蘇氨酰NA合成酶(PL7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
基瓊脂糖凝膠4Bshēng huà shì jì容量：100KU  Rat vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 大鼠維生素D2(VD2)ELISA試劑盒

DNAMarkerⅠ,Wide 10次/30次 Gibco分裝  HumanInhibin,INH-AELISAKit 人抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

四化500克RT  Humancoloncancer-specificaigen-3,CCSA-3ELISA試劑盒人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

流醋軟骨速內(nèi) Chondroitin Sulfctq wo7ium 908-7-9  組織ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒50次

馬來酸鈉 Maleic acid disodium salt hydrate (≥9... 25880-69-7 10G 通用試劑  Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit人同酸脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒寶石橙蛋白染色試劑25克2～8℃  Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(PPLO肉湯)  小鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試劑盒 ，英文名： HPCⅢ ELISA Kit

β-基奈，英文名或英文縮寫：2-Amino，級別：BR，56-58℃，規(guī)格：10克  蛇毒因子(CVF)ELISA檢測試劑盒Cobravenomfactor,CVFELISAKit 96T/48T

5-叔丁基-2-羌基本全 5-TqRT-BUTYL-2-xy7noXY-BqNZcLDqHYDq 72-23-3  人CD19分子(CD19)免疫試劑盒 Human CD19 ELISA Kit

3-基-1,2-丙二醇，英文名或英文縮寫：3-Ami,2-propanediol，級別：CP，規(guī)格：5克  英文名稱MouseMCP-3ELISAkit小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-3(MCP-3)規(guī)格：96T/48T

熒光定量PCR服務(wù)：

公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗，進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)