大鼠小腸粘膜上皮細胞提取物【Rat Intestine: Normal Small Intestinal Mucosa Epithelial Cell Derivatives】

大鼠小腸粘膜上皮細胞提取物是從大鼠小腸粘膜上皮細胞提取的，大鼠小腸粘膜上皮細胞從正常大鼠小腸粘膜組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒   次 4-Benzyloxycarbonyl-piperazinone7881854-芐氧羰基-

親和硅烷   25ml 4'-Benzyloxyacetophenone5469654'-苯乙酮

1×Western半干轉轉膜液   ×1L（粉末）4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate34797N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-芐脂

1×Western濕轉轉膜液   ×1L（粉末）4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate75368N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-芐酯

×RealBlot快速轉膜液   0ml 4-Benzyl L-aspartate21773L-天冬氨酸-芐酯
HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1R,2R)-1-Amino-2-indanol  中文名：(1R,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO 

humanpapillomavirusIgG,HPV-IgGELISAKit人狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (-)-Mandelic acid benzyl ester  97415-09-3  中文名：D-(-)-扁桃酸芐酯  分子式：C15H14O3 

HumanPansondisease2pan,Park2ELISAKit人帕金森氏病2Pan(Park2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R)-4-Methoxydalbergione  4646-86-0  中文名：(R)-4-甲氧基黃檀醌  分子式：C16H14O3 

Humanpan-cytokeratin,P-CKELISAKit人廣譜細胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 

Humanpancreatickininogenase,PKELISAKit人胰激肽原酶(PK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
無蛋白酶牛血清白蛋白  Albumin, from bovine Protease free  質量規(guī)格：>98%,分子生物學級 鈣離子膜通道內質網肌醇1,4,5-三0酸受體(IP3R)功能熒光檢測試劑盒20

硬脂酸鋁  Aluminum stearate  質量規(guī)格：AR 鈣離子膜通道內質網利羅丁受體(ryanodinereceptor;RyR)功能熒光檢測試劑盒20

鉍試劑III(>99%,BR)  Bismuth(III) nitrate pentahydrate  質量規(guī)格：>99%,BR 鈣鎂0酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液500毫升

氫鈣二水(>98%,BR)  Calcium phosphate, dibasic, dihydrate  質量規(guī)格：>98%,BR 鈣調蛋白結合檢測試劑盒篩選5

碳酸鈰  Cerium(III) carbonate, hydrate  質量規(guī)格：>99.9%,AR 鈣轉感受態(tài)細菌制備試劑盒1

胰凝乳蛋白酶原 A  Chymotrypsinogen A  質量規(guī)格：酶活：>1500 U/mg,BC 甘油(glycerol)含量酶連續(xù)循環(huán)反應比色法定量檢測試劑盒20

汽巴藍  Cibacron blue 3G-A  質量規(guī)格：ACS Grade 肝素(heperin)活性比色法定量檢測試劑盒20

DEAE葡聚糖  DEAE Dextran  質量規(guī)格：BR 肝素(heperin)活性比色法定量檢測試劑盒20

氟啶酮(>98%,植物激素級)  Fluridone  質量規(guī)格：>98%,植物激素級 肝素(heperin)纖維蛋白檢測法(Fibrometer)分析試劑盒50

組胺(>98%,BC)  Histamine  質量規(guī)格：>98%,BC 肝素血液抗凝液100毫升
大鼠小腸粘膜上皮細胞提取物價格人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP/α1M)酶聯吸附測定試劑盒   Human AMBP (Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor) ELISA Kit  2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid  104239-97-6  中文名：  分子式：C19H28INO3 

人T細胞活化連接蛋白elisa試劑盒   人T細胞活化連接蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人T細胞活化連接蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人T細胞活化連接蛋白試劑盒、人T細胞活化連接蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     Sitafloxacin  127254-12-0  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3 

人P糖蛋白elisa試劑盒   人P糖蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人P糖蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人P糖蛋白試劑盒、人P糖蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Schleicheol 1  中文名：  分子式：C30H52O2 

人preptinelisa試劑盒   人preptin試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人preptin試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人preptin試劑盒、人preptin elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Sulfamonomethoxine   38006-08-5  中文名：磺胺間甲氧嘧啶鈉  分子式：C11H11N4NaO3S  度：98.0%   

人Pirin蛋白(PIR)酶聯吸附測定試劑盒   Human PIR (Pirin) ELISA Kit  2-Fluoroadenosine  146-78-1  中文名：  分子式：C10H12FN5O4

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。