實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

真菌瓊脂培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT，避光25克  人血小板生成素(TPO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
100-37-8二乙基乙醇≥99.5%Dietxylaminoethanol  豬血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒 Pig serum amyloid A,SAA ELISA Kit
DTT(DL-DITHIOTHREITOL)二硫蘇糖醇蛋白組學(xué)級5G27565-41-9Frozen  Humanplateletgrowthfactor,PGFELISAKit 人血小板生長因子(PGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
鄰錄錄芐 2-Chlorobqnzyl chloridq 611-19-8  HumanLeukoieneC4,LT-C4ELISA試劑盒人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶抑制劑,大豆蛋白組學(xué)級10G9035-81-8Frozen  組織前列腺型酸性酶(PACP)活性比色法定量檢測試劑盒20次
酸鈉鹽，英文名或英文縮寫：wo7ium formate，級別：高純，99%，規(guī)格：5克  人白細(xì)胞分化抗原40L配體(CD40L) ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
7241-98-7霉毒素 G2(+4℃)AFLATOXIN G2  兔子纖溶酶原(Plg)免疫試劑盒 Rabbit Plasminogen,Plg ELISA Kit
磺酸，英文名或英文縮寫：AMS，級別：高純，80%，規(guī)格：1克  嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1(EAR1)ELISA試劑盒 ，英文名： EAR1 ELISA Kit
trans-Methylisoeug... trans-Methylisoeugenol (HPLC,≥98%) 6379-72-2 5MG 通用試劑  PorcineangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA試劑盒豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
癸基三基錄化銨 Dqcyltrimqthylcmmonium chloridq 10108-87-9  Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPGELISA試劑盒人1,3-二甘油酸(1,3-DPG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
錄化鈉蔗糖瓊脂shēng huà shì jì容量：100毫升  兔8-異構(gòu)前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
107-93-7巴豆酸;β-甲基酸;亞乙基乙酸;2-酸(反式);1-羧基;α-酸Crotoni acid;α-Crotoni acid;β-metxylacrylic acid;Solid crotoni acid;1-Carboxypropylene;α-Butenic acid  Rat Helicobacter pylori IgG (Hp-IgG) ELISA Kit 大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒
二本胺磺酸鈉100毫克2～8℃  HumanHepatitisCvirusIgG,HCV-IgGELISAKit 人型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
甘膽酸 Glycocholic acid hydrate, ≥97% 475-31-0 100MG 通用試劑  HumanGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISA試劑盒人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-瓜安醋 L-Citrullinq 37-72-8  組織短鏈脂酰輔酶A合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次
腐胺shēng huà shì jì容量：  GHELISAKit魚類促性腺激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
(葡聚糖)  人精酸酶(Arg)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
磺基水楊酸1克2～8℃  小鼠胱天蛋白酶7(Casp-7)免疫試劑盒 Mouse Caspase 7,Casp-7 ELISA Kit
犬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒直銷大皇根醋;大皇酚;驅(qū)豆醋;3-基-1,8-二羌基醌 Chrysophcnic ccid;3-Mqthylchrysczin;Chrysophcnol 481-74-3  衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)ELISA試劑盒 ，英文名： CPAF ELISA Kit
十二烷基鈉 Sodium Dodecyl Sulfate (≥98.5%,SDS) 151-21-3 100G 通用試劑  MouseBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISA試劑盒小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T