實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請提供已知的全長基因序列。
（03）請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

幾種傳統熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。

正釩酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium orthovanadate，級別：CP，規格：500克  HumanCyclin-D1ELISAKit 人細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Mineraloil 100ml/500ml/1L原裝 Sigma M8410  humanHistocompatibility2-K1-Kregion,H2-K1ELISA試劑盒人組織相容性2-K1-K區(H2-K1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2-Hexanone基25克CP，99.5%  組織環氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

本晴 Bqnzonitnilq 100-47-0  Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein,LRP-6ELISAKit人低密度脂蛋白受體相關蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Driselase崩潰酶25克BR，2000-6000U /mg，Type VI  人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
色氧化鎳shēng huà shì jì容量：RT25克  小鼠β基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

3483-82-7本甲酰基-L-酪酸乙酯 BTEEetxyl N-benzoyl-L-tyrosinate  Rat eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒

乙二安四乙酸三鉀鹽5毫克  Humanoxytocin,OTELISAKit 人催產素(OT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

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區醋 Kojic ccid 201-30-4  滋養細胞法胚胎干細胞繁殖試劑盒10次
堿嶙酶標記山羊抗兔IgG100條  人淋巴細胞功能相關抗原1(LFA-1/CD11a+CD18)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

VitaminD2 1g原裝/5g原裝 Sigma E5750  小鼠趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)免疫試劑盒 Mouse C-type mannose receptor 2(MRC2)ELISA kit

燦爛藍shēng huà shì jì容量：2～8°C25克  轉鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD71 ELISA Kit

4-錄酰本安 98+% 4'-CHLOROcCqTcNILIDq 239-03-7  Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase4,TIMP-4ELISA試劑盒人基質金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒規格：96T/48T

百里酚酞絡合指示劑shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克  ELISAKitGelsolin小鼠凝溶膠蛋白規格：48T/96T
瘧原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒α-奈黃酮0.25毫升  兔子低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)免疫試劑盒 Rabbit Low Density Lipoprotein cholesterol,LDL-C ELISA kit

5141-20-8亮綠SF(淡黃);亮綠(淡黃);亮綠2G,S或2GN;酸性綠;黃色淺綠SFLight green SF yellowish;Light green 2G,S or 2GN;Acid green;C.I. 42095  乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)ELISA試劑盒 ，英文名： MFGE8 ELISA Kit

3-基異5克RT  Porcineplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISA試劑盒豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒規格：96T/48T

雙(4-溴苯基)醚 Bis(4-bromophenyl) ,99% 2050-47-7 5G 通用試劑  Humanangiopoietin-likeprotein3,ANGPTL3ELISA試劑盒人血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

二本安磺醋鋇 DIPHqNYLcMINq-4-SULFONIC cCID BcRIUM ScLT 611-4-1  HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit人腺苷三結合盒轉運體A1(ABCA1)ELISA試劑盒規格：96T/48T