雞IgYelisa檢測試劑盒多少錢IgY ELISA KiT 產品名稱 | 雞IgYelisa檢測試劑盒多少錢 | 英文名稱 | IgY ELISA KiT | 規格 | 48T/96T |
雞IgYelisa檢測試劑盒多少錢IgY ELISA KiT【實驗用途】IgY,由兩條重鏈(H)和輕鏈(L)組成,重鏈(υ)由一個可變區(V)和4個恒定區(C)組成,沒有鉸鏈結構。完整分子量為180KDa(7.8S),重鏈為 67-70KDa,輕鏈為25KDa,但還存在一個小體積副本,120KDa(5.7S),發現于野鴨和某些龜類中。克隆IgY H鏈表明,較小的IgY H鏈缺乏C3、C4區,由于使用了特異的末端外顯子(位于C2和C3恒定區外顯子間的內含子中),5.7S的IgY的H鏈僅有兩個C區,實際與7.8S IgY的H鏈CH1和CH2相*。5.7S IgY與F(ab`)2片段十分相似,因此正確名稱為IgY(△Fc),其H鏈為υ(△Fc)。7.8S IgY和5.7S IgY(△Fc)可共存于同一種動物或單獨存在:鴨和鵝都有全長和截短的IgY,雞和火雞僅有全體積的IgY分子。比較IgG和IgY的恒定區發現,IgG的Cγ2、Cγ3與IgY的Cυ3、Cυ4極相似,而Cυ2可能經“壓縮”形成IgG的鉸鏈結構,鉸鏈結構是哺乳動物抗體的*結構。在IgY分子結構上的Cυ1-Cυ2和Cυ2-Cυ3間存在脯氨酸、甘氨酸殘基,這些區域為IgY分子提供了一定的擺動性。所提供的ELISA Kit是典型的競爭法酶聯免疫吸附測定試劑(ELISA)。預先包被的抗體為抗雞IgY抗體,檢測相為HRP標記雞IgY。樣品和HRP標記雞IgY同時加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測蛋白呈反相關。。 試劑配制: 1、雞IgYelisa檢測試劑盒多少錢酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。 2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。 3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 樣本處理及要求: 1.雞IgYelisa檢測試劑盒多少錢血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。 仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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